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版权所有·禁止翻制、电子发售 中 华 人 民 共 和 国 出 入 境 检 验 检 疫 行 业 标 准 犛犖／犜２７７３ —２０１１ 国 境 口 岸 五 种 生 物 恐 怖 病 原 菌 快 速 筛 查 方 法 属 通 用 引 物 基 因 悬 浮 芯 片 法 犚犪狆犻犱狊犻犿狌犾狋犪狀犲狅狌狊狊犮狉犲犲狀 犿犲狋犺狅犱 犳狅狉犳犻狏犲 犫犻狅狋犲狉狉狅狉犻狊犿 犫犪犮狋犲狉犻犪 犪狋犳狉狅狀狋犻犲狉 狆狅狉狋— 犌犲狀犲 狊狌狊狆犲狀狊犻狅狀 犪狉狉犪狔 狑犻狋犺 狌狀犻狏犲狉狊犪犾狆狉犻犿犲狉狊狅狀 犵犲狀狌狊犾犲狏犲犾 ２０１１０２２５ 发 布 ２０１１０７０１ 实 施 中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布 犛犖／犜２７７３ —２０１１ 版权所有·禁止翻制、电子发售 前 言 本 标 准 按 照 ＧＢ／Ｔ１．１—２００９ 给 出 的 规 则 起 草 。 请 注 意 本 文 件 的 某 些 内 容 可 能 涉 及 专 利 。 本 文 件的 发 布 机 构 不 承 担 识 别 这 些 专 利 的 责 任。 本 标 准 由 国 家 认 证 认 可 监 督 管 理 委 员 会 提 出并 归 口。 本 标 准 起 草 单 位 ：中 国 检 验 检 疫 科 学 研 究院 、河 北 国 际 旅 行 卫 生 保 健 中 心。 本 标 准 主 要 起 草 人 ：杨 宇 、张 晓 龙 、孙肖 红 、王 惠 兰 、张 乐 、王 静 、杨 永 莉。 Ⅰ 犛犖／犜２７７３ —２０１１ 版权所有·禁止翻制、电子发售 国 境 口 岸 五 种 生 物 恐 怖 病 原 菌 快 速 筛 查 方 法 属 通 用 引 物 基 因 悬 浮 芯 片 法 １ 范 围 本 标 准 规 定 了 用 于国 境 口 岸 快速 筛 查 炭 疽芽 孢 杆 菌 （犅犪犮犻犾犾狌狊 犪狀狋犺狉犪犮犻狊 ，犅 ．犪 ）、鼠 疫 耶尔 森 菌 （犢犲狉狊犻狀犻犪 狆犲狊狋犻狊 ，犢 ．狆 ）、布 鲁 菌 （犅狉狌犮犲犾犾犪 ｓｐｐ ．，犅狉狌 ）、土 拉 弗 朗 西 斯 菌（犉狉犪狀犮犻狊犲犾犾犪狋狌犾犪狉犲狀狊犻狊 ，犉 ．狋）和 类 鼻 疽 伯 克 霍 尔 德 菌 （犅狌狉犽犺狅犾犱犲狉犻犪狆狊犲狌犱狅犿犪犾犾犲犻，犅 ．狆 ）五 种 重 要 生 物 恐 怖 病 原 菌 的基 因 悬 浮 芯 片 筛 查 方 法。 本 标 准 适 用 于 国 境 口 岸 发 现 的 可 疑 物 品 或 环境 样 品 中 五 种 重 要 生 物 恐 怖 病 原 菌 的 筛 查。 ２ 规 范 性 引 用 文 件 下 列 文 件 对 于 本 文 件 的 应 用 是 必 不 可 少 的 。 凡 是注 日 期 的 引 用 文 件 ，仅 注 日 期的 版 本 适 用 于 本 文 件 。 凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件 ，其 最 新 版 本 （包括 所 有 的 修 改 单 ）适 用 于 本 文 件。 ＧＢ １９４８９ 实 验 室 生 物 安 全 通用 要 求 ＳＮ／Ｔ１５５２ 国 境 口 岸 生 物 因 子 恐 怖 事 件 监 测 规 程 ＷＳ ２３３ 微 生 物 和 生 物 医 学 实 验 室 生 物 安全 通 用 准 则 ３ 术 语 和 定 义 下 列 术 语 和 定 义 适 用 于 本 文 件。 ３．１ 生 物 恐 怖 病 原 菌 犫犻狅狋犲狉狉狅狉犻狊犿 犫犪犮狋犲狉犻犪 可 用 于 生 物 恐 怖 袭 击 的 危 害 人 体 健 康 的 病 原细 菌 ，主 要 包 括 炭 疽 芽 孢 杆 菌 、鼠 疫 耶 尔 森 菌 、布 鲁 菌、 土 拉 弗 朗 西 斯 菌 和 类 鼻 疽 伯 克 霍 尔 德 菌 等 ，其特 点 是 感 染 剂 量 低 、毒 性 高 、致病 性 强 ，感 染 后 潜 伏 期 短、 发 病 率 高 ；传 染 性 强 ，可 通 过不 同 途 径 感 染 人 体 ；在外 环 境 中 稳 定 性好 ，易 于 生 产 、保 存、包 装 、运 输 和 释 放。 ３．２ 基 因 悬 浮 芯 片 犵犲狀犲 狊狌狊狆犲狀狊犻狅狀 犪狉狉犪狔 利 用 带 编 码 的 微 球 体 作 为 载 体 ，流 式 细 胞仪 作 为 检 测 平 台 ，对 核 酸 进 行 大 规 模 测 定 的 一 种 生 物 芯 片 技 术。 ４ 生 物 安 全 防 护 要 求 ４．１ 排 查 前 做 好 个 人 防 护 。 防 护 方 法 和标 准 见 ＳＮ／Ｔ１５５２ 。 ４．２ 实 验 室 应 遵 循ＧＢ １９４８９ 和ＷＳ ２３３ 对 生 物安 全 Ⅱ 级 （ＢＳＬ２）实验 室 的 生 物 安 全 要 求。 ４．３ 使 用 过 的 实 验 用 品 应 遵 照ＧＢ １９４８９ 的 要求 ，对 废 弃 物 应 进 行 无 害 化 处 理。 １ 犛犖／犜２７７３ —２０１１ 版权所有·禁止翻制、电子发售 ５ 主 要 设 备 与 试 剂 ５．１ 主 要 设 备 悬 浮 芯 片 系 统 、荧 光 显 微 镜 、水 平电 泳 仪 、凝 胶 成 像 系 统 、离心 机 、ＰＣＲ仪 、生 物 安 全 柜 、移液 器 、核 酸 蛋 白 检 测 仪 、真 空 泵 、涡 流 振 荡 仪。 ５．２ 主 要 试 剂 ＬＢ 液 体 培 养 基 （见Ａ ．１）、 ＬＢ 固 体 培 养 基 （见 Ａ ．２）、ＤＳＭ 芽 孢 培 养 基 （见 Ａ ．３）、ＰＣＲ 反 应 预 混 液 （见 Ａ ．４）、氯化 四 甲 铵 （Ｔ Ｍ ＡＣ ）、１．５× Ｔ Ｍ ＡＣ杂 交 液 （见 Ａ ．５）、１ × Ｔ Ｍ ＡＣ 杂 交 液 （见Ａ ．６）、羧 基 化 编 码 微 球 、２［犖吗啉 ］乙 磺酸 （Ｍ ＥＳ）、１（３二甲 氨 基 丙 基 ）３乙基 碳 二 亚 胺 盐 酸 盐 （ＥＤＣ）、ＳＤＳ、犖十 二 烷 基 肌 氨 酸 钠 、链 亲 和 素藻红 蛋 白 （ＳＡＰ Ｅ ）、乙 二 胺 四 乙 酸 （ＥＤＴＡ）、６ ｍｏｌ／Ｌ碘 化 钠 （ＮａＩ）、玻璃 粉 、７０ ％ 乙 醇 、Ｔｒｉｓ 饱 和 酚 、三 氯 甲 烷 、吐 温２０。 ６
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