文本描述
版权所有·禁止翻制、电子发售 中 华 人 民 共 和 国 出 入 境 检 验 检 疫 行 业 标 准 犛犖／犜１１４２ —２０１１ 代 替 ＳＮ／Ｔ１１４２ —２００２ ，ＳＮ／Ｔ１３７７ —２００４ 马 病 毒 性 动 脉 炎 检 疫 技 术 规 范 犙狌犪狉犪狀狋犻狀犲 狆狉狅狋狅犮狅犾犳狅狉犲狇狌犻狀犲 狏犻狉犪犾犪狉狋犲狉犻狋犻狊 ２０１１０５３１ 发 布 ２０１１１２０１ 实 施 中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布 版权所有·禁止翻制、电子发售 犛犖／犜１１４２ —２０１１ 前 言 本 标 准 按 照 ＧＢ／Ｔ１．１—２００９ 给 出 的 规 则 起 草 。 本 标 准 代 替 ＳＮ／Ｔ １３７７—２００４《从 精 液 中 分 离 马 病 毒 性 动 脉 炎 病 毒 试 验 操 作 规 程 》和 ＳＮ／Ｔ １１４２—２００２ 《马 病 毒 性 动 脉 炎 微 量 血 清 中 和 试 验 操作 规 程》。 本 标 准 与 ＳＮ／Ｔ１１４２ —２００２和 ＳＮ／Ｔ１３７７ —２００４相 比 ，主 要 的 技 术 变 化 如 下： ——— 增 加 了 血 液 、组 织 中 的 病 毒 分 离； ——— 增 加 了 酶 联 免 疫 吸 附 试 验 方 法； ——— 增 加 了 荧 光 试 验 方 法。 ＲＴＰＣＲ 本 标 准 由 国 家 认 证 认 可 监 督 管 理 委 员 会 提 出并 归 口。 本 标 准 起 草 单 位 ：中 华 人 民 共 和 国 山 东 出入 境 检 验 检 疫 局。 本 标 准 主 要 起 草 人 ：梁 成 珠 、朱 来 华 、郑小 龙 、李 西 峰。 本 标 准 所 代 替 标 准 的 历 次 版 本 发 布 情 况 为： ——— ＳＮ／Ｔ１１４２ —２００２ ——— ＳＮ／Ｔ１３７７ —２００４ ； 。 Ⅰ 版权所有·禁止翻制、电子发售 犛犖／犜１１４２ —２０１１ 马 病 毒 性 动 脉 炎 检 疫 技 术 规 范 １ 范 围 本 标 准 规 定 了 马 病 毒 性 动 脉 炎 的 病 毒 分 离 鉴定 、微 量 血 清 中 和 试 验 、酶 联 免 疫 吸 附 试 验 和 荧 光 ＲＴ ＰＣＲ试 验 等 方 法。 本 标 准 适 用 于 进 出 境 马 属 动 物 病 毒 性 动 脉 炎的 诊 断 和 检 疫。 ２ 规 范 性 引 用 文 件 下 列 文 件 对 于 本 文 件 的 应 用 是 必 不 可 少 的 。 凡 是注 日 期 的 引 用 文 件 ，仅 注 日 期的 版 本 适 用 于 本 文 件 。 凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件 ，其 最 新 版 本 （包括 所 有 的 修 改 单 ）适 用 于 本 文 件。 ＧＢ／Ｔ６６８２ 分 析 实 验 室 用 水 规 格 和 试 验 方 法 ＧＢ １９４８９ —２００８ 实 验 室 生 物 安 全 通 用 要 求 ３ 缩 略 语 下 列 缩 略 语 适 用 于 本 文 件。 ＲＫ１３ ：兔 肾 细 胞 ＰＢＳ：磷酸 盐 缓 冲 生 理 盐 水 ＣＰＥ ：细 胞 病 变 反应 ＥＡ Ｖ ：马 病 毒 性 动 脉 炎 病 毒 ＴＣＩＤ５０ ：半 数 组 织 感 染 量 ＥＬＩＳＡ：酶 联 免 疫 吸 附 试 验 ＲｅａｌｔｉｍｅＲＴＰＣＲ：荧 光 反 转 录聚合 酶 链 式 反 应 ４ 临 床 诊 断 ４．１ 临 床 特 征 发 病 马 的 临 床 症 状 表 现 不 一 ，一 般 为 发 热，精 神 沉 郁 ，食 欲 不 振 ，流 鼻 液 ，流 泪 ，结 膜 炎 ，眼 睑 水肿 ，颔 下 淋 巴 结 肿 大 ，白 细 胞 减 少 ，四 肢 特 别是 后 肢 下 端 水 肿 ，雄 马 阴 囊 及 包 皮 肿 胀 ，妊 娠 马 流 产 。 老 龄 雌 马 和 营 养 状 况 差 的 马 临 床 症 状 较 重 ，妊 娠 马 比空 怀 雌 马 症 状 明 显 。 如 果 妊 娠 马 群 发 生ＥＡ Ｖ 流 行 ，流 产 率 可 高 达 ４０ ％ ～５９ ％。 ４．２ 判 定 根 据 ４．１临 床 检 查 可 作 出 初 步 判 定 ，确 诊 需 进 行 实 验 室 检 测。 １ 版权所有·禁止翻制、电子发售 犛犖／犜１１４２ —２０１１ ５ 病 毒 分 离 鉴 定 ５．１ 仪 器 设 备 超 净 工 作 台或 生 物 安 全柜 、二 氧 化 碳培 养 箱 、倒 置显 微 镜 、液 氮贮 存 罐 、蔡氏 滤 器 和 微 孔滤 膜 （０．２２ μｍ ）、高压 灭 菌 锅 、离 心 机 、超 声 波 破 碎 仪 、微 量 细 胞 培 养 板 （９６孔 ）、微 型 振 荡 器 、微 量 可 调 移 液 器 （２００ μＬ ）、电 子 天 平 、细 胞 瓶 和 吸 管 （１ ｍＬ 、２ ｍＬ、５ ｍＬ 、１０ ｍＬ ）等。 ５．２ 试 剂 与 材 料 Ｍ Ｅ Ｍ 培 养 基 、抗 生 素 贮 存 液 、细 胞 消 化 液 、细 胞培 养 液 和 细 胞 维 持 液 、１％细 胞 染 色 液 、７．５％ 羧 甲 基 纤 维 素 、红 细 胞 裂 解 液 、磷 酸 盐 缓 冲液 （ＰＢＳ）、兔肾 细 胞 （ＲＫ１３ ）、马 病 毒性 动 脉 炎 病 毒 （ＥＡ Ｖ ）标 准 病 毒 株 （Ｂｕｃｙｒｕｓ 株 ）和各 种 常 规 试 剂 等 ，试 剂 配 制 见 附 录 Ａ。 ５．３ 样 品 采 集 与 处 理 ５．３．１ 样 品 采 集 与 运 送 无 菌 采 集 动 物 抗 凝 全 血 （不 宜 用 肝 素 作 抗凝 剂 ），死 胎 或 活 产 马 驹 的 脑 、心 、肺 、肝 、肾 、脾 和淋 巴 结 等 组 织 ，公 马 可 采 集 精 液 。 采 集 的 样 品应 立 即 放 入 冰 盒 中 ，尽快 运 送 到 实 验 室 。 如 果 不 能及 时 送 往 实 验 室 ，组 织 样 品 冷 冻 于 －２０℃ 以 下 保 存 （抗
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