ICS65.02fJ B15 中华人民共和国农业行业标准 NY/T2050—2011 玉米霜霉病菌检疫检测与鉴定方法 Detection and identification of Peronosclerospora spp. 2011-09-01发布2011-12-01 实施 中华人民共和国农业部 发布   NY/T 2050—2011 前言 本标准按照 GB／T 1.1——2009给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国农业部种植业管理司提出。 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC／TC 271)归口。 本标准起草单位：全国农业技术推广服务中心、广西壮族自治区植保总站。 本标准主要起草人：王福祥、王凯学、覃贵亮、吴志红、邓铁军、李潇楠、李菁、沈昆、朱莉。 Ⅰ   NY/T 2050—2011 玉米霜霉病菌检疫检测与鉴定方法 1范围 本标准规定了玉米霜霉病菌的现场检验及室内鉴定的方法。 本标准适用于玉米、甘蔗、高粱等禾本科植物上玉米霜霉病菌的检疫检测与鉴定。 2原理 玉米霜霉病主要由玉蜀黍霜指霉（Peronosclerospora maydis）、高梁霜指霉（Psorghi）、菲律宾霜 指霉(P. philippinensis)和甘蔗霜指霉（P．sacchari）引起，该类菌（以下简称玉米霜霉病菌 Peronoscle- rospora spp.）属于卵菌纲(Oomycetes)，指梗霉目(Sclerosporales)，指梗霉科(Sclerosporaceae)，霜指霉属 (Peronosclerospora)。该病菌都是专性寄生在禾本科植物上(参见附录 A)，可侵染玉米的叶片和茎秆造成 系统和局部症状。这 4种病菌引起的玉米霜霉病有明显的症状，病原菌有其独特的形态特征，用特异引 物对病菌 DNA进行PCR扩增时可获得特异的DNA片段。病害的症状、病原菌的形态特性以及PCR特 异反应特征是鉴定玉米霜霉病菌的主要依据。 3试剂与材料 棉蓝乳酚油、吐温- 20、乙醇、11.5%NaOH、0.015%Trypane Blue、乳酸、甘油、10倍PCR缓冲液、 玉米霜霉病菌 DNA的特异性引物、dNTP、Taq酶、5倍TBE电泳缓冲液、琼脂糖凝胶(0.8%)、吸水纸、 无菌水、蒸馏水，1 000 bp DNA ladder等。 4仪器及用具 盖玻片、载玻片、生物显微镜、高速台式离心机、PCR扩增仪、天平、高压灭菌锅、恒温培养箱、水平 电泳仪、凝胶成像系统、PCR反应管、微量移液器、移液器、解剖刀、培养皿、烧杯、漏斗、镊子、分 样筛(5 mm、4 mm、3 mm)、吸管等。 5现场检测 5.1产地检测 在寄主大田作物生长期逐行进行田间症状目测踏查。按要求采集有典型症状和疑似症状的玉米霜霉 病样本进行室内检验鉴定。玉米霜霉病典型症状参见附录 B。 5.2调运检测 现场核实货物有关单证 ,核实产地。重点检查来自玉米霜霉病菌发生区的其寄主种子或原粮中是 否夹带玉米、高粱、甘蔗等叶片病残体，是否夹带颖壳的高粱种子；带玉米、高梁植株残体的包装、铺垫材 料，以及甘蔗插条和其他玉米霜霉病菌寄主种苗叶片是否有可疑病斑，将检获物带回实验室作进一步检 验。 6室内检测 6.1寄主叶片等病残体检测 6.1.1直接镜检检测 如果寄主叶片上有白色霜霉状物，可直接挑取白色霜霉或撕取带有白色霜霉的病组织制成玻片样 品在显微镜下观察病原菌的孢囊梗和孢子囊形态。如果染色观察，加 1滴棉蓝乳酚油染色后立即用无 1