ICS 65.020.01 B 31 DB32 备案号：31279-2011 江 苏省地方标准 DB32/T 1879-2011 黑莓中鞣花酸含量的测定 高效液相色谱法 Method for determination of Ellagic Acid in Blackberry High Performance Liquid Chromatography Method 2011-08-15发布 2011-10-15实施 发布 江苏省质量技术监督局  DB32/T 1879-2011 前 言 本标准按GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》的规定编制。 本标准由江苏省农业科学院提出。 本标准起草单位：江苏省农业科学院农产品加工研究所。 本标准主要起草人：刘小莉、周剑忠、单成俊、王英、李莹、张丽霞。 I  DB32/T 1879-2011 黑莓中鞣花酸含量的测定高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了用高效液相色谱法测定黑莓中鞣花酸含量的方法。 本标准适用于黑莓鲜果、黑莓叶子、黑莓籽等产品中鞣花酸的测定。 本方法最低检测限为黑莓鲜果中鞣花酸含量在 0.2mg/100g、黑莓叶和黑莓籽中鞣花酸含量在 1mg/100g以上。 2 规范性引用文献 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注明日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682-2008 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 利用鞣花酸的结构特性，是没食子酸的二聚衍生物，是一种多酚二内酯，呈反式没食子酸单宁结构， 有多个共轭双键结构，在254nm处有最大吸收峰。 4 仪器设备 4.1 4.2 4.3 4.4 4.5 高效液相色谱仪，配有紫外检测器 电子分析天平 高速组织捣碎机 超声波清洗器 高速离心机 5 试剂和溶液 以下所用试剂和水，除特别注明者外均为分析纯试剂，水为符合GB/T 6682-2008中规定的三级水。 鞣花酸标准溶液：准确称取鞣花酸标准品5.0mg，以色谱纯甲醇溶解，并定容至5mL，摇匀，配成浓 度为1mg/mL的母液，4℃保存； 无水乙醇； 乙腈，色谱纯； 磷酸； 石油醚。 6 试样制备 1  DB32/T 1879-2011 6.1 黑莓鲜果 准确称取250g新鲜黑莓样品，加100ml去离子水，用高速组织捣碎机打浆。取50ml匀浆，加入等体 积的无水乙醇，于超声波中处理20min后，10000转/分钟离心10min，取上清，沉淀中加入50ml50%乙醇 溶液按上述步骤重复提取2次，合并上清，定容至200ml。以0.45μm滤膜过滤后4℃保存备用。 6.2 黑莓叶子 新鲜黑莓叶子于电热恒温干燥箱50℃烘干至恒重，用高速粉碎机粉碎1min，过孔径0.28mm筛后备 用。准确称取5g黑莓叶粉末，加40ml50%乙醇溶液，于超声波中处理20min后，10000转/分钟离心 10min，取上清，沉淀中加入50ml 50%乙醇溶液按上述步骤重复提取2次，合并上清，定容至200ml。 以0.45μm滤膜过滤后4℃保存备用。 6.3 黑莓籽 新鲜黑莓种籽于电热恒温干燥箱50℃烘干至恒重，用高速粉碎机粉碎1min，过孔径0.28mm筛后备 用。准确称取5g黑莓籽粉末，加入40ml石油醚，100转/分钟振荡30min，弃去石油醚层，残余黑莓籽 中加40ml 50%乙醇溶液，于超声波中处理20min后，10000转/分钟离心10min，取上清，沉淀中加入 50ml50%乙醇溶液按上述步骤重复提取2次，合并上清，定容至200ml。以0.45μm滤膜过滤后4℃保存 备用 7 检测方法 7.1 高效液相色谱条件 色谱柱：ZORBAX SB-C18柱（4.6×250mm，5μ m） 流动相：乙腈-1.2%磷酸（18：82），流速1mL/min 温度：30℃ 进样量：20μL 检测器：紫外检测器，波长254nm 7.2 标准曲线 用流动相稀释标准储备液，配制系列浓度的标准工作溶液：5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL 、 100 μg/mL。在上述色谱条件下测定，以峰面积为纵坐标、相应的标准工作溶液浓度为横坐标，绘制标 准曲线。鞣花酸标样的高效液相色谱图见附录A。 7.3 样品检测 将过滤后的试样溶液在上述色谱条件下测定，用峰面积在标准曲线上计算试样溶液中鞣花酸的浓 度。 7.4 结果计算与表达 7.4.1 结果计算 结果按式（1）式计算： X= C ?V ?100-------------------------------------------------(1) m 式中： 2  DB32/T 1879-2011 X—试样中鞣花酸含量，单位为毫克每100克（mg/100g）; C—由标准曲线上查出或由直线回归方程求出的样品中鞣花酸的含量，单位为毫克每毫升（mg/mL）; V—试样制备体积，单位为毫升（mL）； m—试样的质量（g）； 7.4.2 平行测定结果 用算术平均值表示，保留三位有效数字。 8 允许差 同一分析者对同一试样同时测定两次（或重复测定）所得结果相对偏差不大于10％。 3