ICS65.020.30 B40 D B 32 备案号： 江 苏省地方标准 DB32/T1824—2011 禽肉肌纤维特性的测定石蜡切片法 Determinationofpoultrymusclefibercharacteristic ——Paraffinsectionmethod 2011-06-15发布 2011-08-15实施 发布 江苏省质量技术监督局  DB32/T1824—2011 前 言 本标准按GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构与编写》的规定编写。 本标准由江苏省家禽科学研究所提出。 本标准起草单位：江苏省家禽科学研究所、农业部家禽品质监督检验测试中心（扬州）、扬州翔龙 禽业发展有限公司。 本标准主要起草人：唐修君、高玉时、王克华、葛庆联、陆俊贤、施祖灏、张小燕、蒲俊华。 I  DB32/T1824—2011 禽肉肌纤维特性的测定石蜡切片法 1范围 本标准规定了石蜡切片法测定禽肉肌纤维特性的术语和定义、试剂与配制、仪器和设备、样品处理、 切片制作、读片与计算、数据纪录和允许差。 本标准适用于石蜡切片法测定禽类肌纤维密度、直径、间距、肌束间距以及肌大束间距。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本部分。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本部分。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3术语和定义 下列术语和定义适用于本标准 3.1 肌纤维密度Musclefiberdensity 同一肌束内，单位面积肌纤维根数。 3.2 肌纤维直径Musclefiberdiameter 肌纤维长径与短径的几何平均数。 3.3 肌纤维间距Musclefibergap 同一肌束内，相邻肌纤维之间的垂直距离。 3.4 肌束间距Musclebundlegap 同一肌大束内，相邻肌束之间的垂直距离。 3.5 肌大束间距Distancebetweenmusclebundles 相邻肌大束之间的垂直距离。 4试剂与配制 1  DB32/T1824—2011 除特殊注明外，本法所用试剂均为分析纯，用水符合GB/T6682一级水的规定。 4.14%甲醛溶液 1体积甲醛与9体积水混匀。 4.2无水乙醇 4.375%酒精 7.5体积无水乙醇与2.5体积水混匀；85%酒精：8.5体积无水乙醇与1.5体积水混匀；95%酒精：9.5 体积无水乙醇与0.5体积水混匀。 4.4二甲苯 4.5石蜡 65℃反复提炼，直至蜡的颜色泛黄可用。 4.6苏木素 4.71%盐酸酒精 1体积盐酸与99体积无水乙醇混匀。 4.80.5%伊红酒精 称取0.5g伊红，用100mL无水乙醇溶解。 4.9中性树脂 5仪器和设备 5.1组织切片机 切片厚度5μm～1000μm。 5.2烘箱 精度±1℃。 5.3恒温水浴锅 精度±1℃。 5.4包埋框 5.5镊子 使用之前放入60℃烘箱中预热。 5.6载玻片和盖玻片 用洗液浸泡24h后用自来水充分洗涤，再用95%酒精浸泡后用软绸布或纱布擦干，待用。 5.7光学显微镜 2  DB32/T1824—2011 放大倍数10×4至10×40。 6样品处理 6.1取样与固定 家禽宰杀放血后，在30min内顺着肌纤维方向取样，胸肌取样部位为胸大肌前端1/3、距龙骨2cm 处，腿肌取样部位为大腿肌中部，距股骨1cm处，取样大小为长×宽×高约2cm×1cm×1cm。剔除肌 肉表面筋、腱、膜及脂肪，随即置于4%甲醛溶液中固定10h，取出修成0.7cm×0.6cm×0.4cm大小的 组织块，重新置于4%甲醛溶液中继续固定12h。 6.2洗涤 将组织样置于流动的自来水下，浸泡10h~15h。 6.3脱水 采用不同浓度的酒精对组织样进行梯度脱水，脱水步骤、酒精浓度和各步骤所需时间见表1。 表1脱水步骤、酒精浓度和各步骤所需时间 步骤 一 酒精浓度 75% 时间 2h～4h 2h～4h 2h～4h 2h～3h 2h～3h 二 85% 三 95% 四 无水乙醇 无水乙醇 五 6.4透明 将组织放进二甲苯中浸泡10min～15min，至组织呈半透明或透明状态，用肉眼可观察到透明感时 立即取出。 6.5浸蜡和换蜡 6.5.1浸蜡：将透明好的组织块完全置于60℃石蜡中浸泡2h。 6.5.2换蜡：将蜡块取出立即另置于60℃新蜡中再浸泡2h左右。 6.6包埋和修块 将熔化的石蜡倒入包埋框，待蜡将近凝固之前，用镊子将组织块放至包埋框接近底部的位置，使肌 纤维长轴与待切面垂直，将准备好的标签放在待凝固的蜡上面，完全自然冷却后，切去余蜡部分，根据 需要适当修整蜡块，一般修成方形或梯形。 7切片制作 7.1切片、展片和贴片、烤片 7.1.1切片：使用组织切片机切片，切片厚度宜为7μm，前15张切片一般不用。 7.1.2展片和贴片：将切好的蜡片轻轻平铺于10-20℃水中展片，用载玻片从切片下面轻轻捞起，立 3