ICS11.220 B 41 DB22 备案号：42280-2014 吉林省地方标准 DB 22/T 2078—2014 鹿源结核杆菌基因分型 MLVA法 MLVA Method for Genotyping of Mycobacterium Tuberculosis from Deer 2014-05-04发布 2014-06-01实施 吉林省技术质量监督局发 布   DB22/T 2078—2014 前言 本标准按照GB/T 1.1-2009和GB/T 20001.4-2001给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国吉林出入境检验检疫局提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国吉林出入境检验检疫局、吉林农业大学、吉林省中韩动物科学研 究院。 本标准主要起草人：王春雨、杨莉、李忠平、石建平、王全凯、孙磊、宋立品、孔德鑫。 I   DB22/T 2078—2014 鹿源结核杆菌基因分型 MLVA法 1范围 本标准规定了鹿源结核杆菌MLVA分型方法。 本标准适用于鹿源结核杆菌MLVA基因分型。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单） 适用于本文件。 GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法 GB 19489实验室生物安全通用要求 SN/T 2025动物检疫实验室生物安全操作规范 3缩略语 下列缩略语适用于本文件。 3.1MLVA: 多位点可变数目串联重复序列分析 3.2DNA marker：脱氧核糖核酸分子标记 3.3SDS: 十二烷基硫酸钠 3.4PCR: 聚合酶链式反应 3.5Tris-HCl: 三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液 3.6EDTA：乙二胺四乙酸 4生物安全要求 操作过程的生物安全措施应遵守GB 19489和SN/T 2025的有关规定。 5原理 多位点数目可变串联重复序列分型(multiple locus VNTRs analysis，MLVA)以PCR扩增为基础，利 用PCR方法扩增散在于菌株基因组中的不同独立位点可变数目串联重复序列(VNTR)，对扩增产物进行DNA 分析确定长度，根据不同位点重复序列单拷贝长度计算出拷贝数，由不同位点拷贝数组成菌株基因型。 6材料与试剂 6.1实验用水：本实验用水为符合GB/T 6682要求双蒸水。 6.250 bp DNA marker 1