ICS67.050 X 04 DB22 备案号：37939-2013 吉林省地方标准 DB 22/T 1820—2013 粮食中串珠镰刀菌的PCR检测 PCR detection of Fusarium moniliform in grains 2013-05-15发布 2013-09-01实施 吉林省质量技术监督局发 布   DB22/T 1820—2013 前言 本标准按照GB/T 1.1-2009和GB/T 20001.4-2001给出的规则起草。 本标准由吉林省质量技术监督局提出并归口。 本标准主要起草单位：吉林省产品质量监督检验院、中华人民共和国吉林出入境检验检疫局。 本标准主要起草人：史艳宇、魏春艳、刘金华、王莹、初真林、刘晓晖、周亮、王潇、张涛、王颖、 冷喜芳。 I   DB22/T 1820—2013 粮食中串珠镰刀菌的PCR检测 1范围 本标准规定了粮食中串珠镰刀菌的PCR检测方法。 本标准适用于粮食中串珠镰刀菌的快速筛选检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 4789.15食品微生物学检验 霉菌和酵母计数 GB/T 4789.16食品卫生微生物学检验 常见产毒霉菌的鉴定 GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法 GB 19489实验室生物安全通用要求 WS/T 230临床诊断中聚合酶链式反应（PCR）技术的应用 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 串珠镰刀菌Fusarium moniliform 串珠镰刀菌是一种重要的农作物病原真菌，能引起禾本科作物的根腐、茎腐和穗腐，是玉米青枯 病和穗腐病的主要病原真菌之一。 3.2 聚合酶链式反应polymerase chain reaction，PCR 模板DNA先经高温变性成为单链，在DNA聚合酶作用和适宜的反应条件下，根据模板序列设计的 两条引物分别与模板DNA两条链上相应的一段互补序列发生退火而相互结合，接着在DNA聚合酶的作 用下以四种脱氧核糖核酸（dNTP)为底物，使退火引物得以延伸，然后不断重复变性、退火和延伸这一 循环，使位于两段已知序列之间的DNA片段呈几何倍数扩增。 4试剂和材料 除特别说明以外，所用试剂为分析纯或生化试剂。 4.1水：应符合GB/T 6682中一级水的规格。 4.2马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基（Potato dextrose agar，PDA）：按 GB 4789.15规定。 4.3 CTAB缓冲液：55mmol/L CTAB、1 400 mmol/L氯化钠、20mmol/L EDTA、100 mmol/L Tris，用 10%盐酸（HCl）调 pH至8.0，121℃，20min高压灭菌，储存于2℃~8℃。 1