ICS11. 220 DB21 B41 辽 宁省地方标准 DB 21/ T2466—2015 禽流感病毒免疫层析（胶体金）检测方法 Method of the immunochromatogarphicassay for the detection of avian influenza virus 2015 -04 -30发布 2015 -06 -30实施 辽宁省质量技术监督局 发布  DB21/ T2466—2015 前 言 本标准根据GB/ T1. 1- 2009的有关规定进行制定。 本标准由辽宁省动物疫病预防控制中心提出。 本标准由辽宁省畜牧兽医局归口。 本标准由辽宁省质量技术监督局发布。 本标准负责起草单位：辽宁省动物疫病预防控制中心、辽宁省动物医学研究院。 本标准起草人：李树博、赵晓彤、金梅林、董晓辉、吴运谱、高志峰、于长泳、王志国、赵鹏、徐 高原、王志勇 I  DB21/ T2466—2015 禽流感病毒免疫层析（胶体金）检测方法 1 范围 本标准规定了禽流感病毒免疫层析方法的材料设备、检测样品处理、检测方法、判定标准、废弃物 处理。 本标准适用于检测禽排泄物、组织、鸡胚尿囊液及细胞培养物中的禽流感病毒。 本标准适用于生物安全二级实验室操作。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 NY/ T541- 2002 动物疫病实验室检验采样方法 GB16548 病害动物和病害动物产品生物安全处理规程 GB/ T16569 畜禽产品消毒规范 3 材料设备 3. 1 检测卡 禽流感病毒检测试纸条装在塑料卡中制成检测卡，铝箔密封，内装干燥剂，室温或冷藏保存。测试 卡结构及测试部位如下图所示。 样品孔（S） 检测区 检测线（T）质控线（C） 图1 3. 2 样品处理液 Tr i sBase 24. 2g、Tr i t on- x10010mL，加注射用水至1000mL，调pH值至9. 0，过滤除菌，无菌分 装，1mL/管。 1  DB21/ T2466—2015 3. 3 其他 塑料吸管、棉拭子、高速冷冻离心机 4 检测样品处理 4. 1 泄殖腔拭子检测样品的处理 将收集的泄殖腔棉拭子插入到含有处理液的样品管中，充分混合，使其充分洗脱，以2℃～8℃， 12, 000r / mi n离心 10mi n，取上清待检。 4. 2 组织检测样品的处理 称取组织块 0. 5g，置于匀浆器中，加生理盐水1mL，研磨完全后取出组织浸出液，然后置 2℃～8 ℃，12, 000r / mi n离心 10mi n，取上清待检。 4. 3 鸡胚尿囊液样品的处理 尿囊液样品以 2℃～8℃，12, 000r / mi n离心 2mi n，取上清待检。 4. 4 细胞培养样品的处理 细胞培养液可直接用于检测或者冻融一次后检测。 5 检测方法 取适量的检测样品（80μL～120μL，滴管 3滴～4滴），缓慢滴加到样品孔中，当看到红色液体在 试纸条上移动时，放慢加样速度。整个加样过程控制在 1mi n内完成。加样完成后将试纸条平放在桌面 上，5mi n～30mi n内观察结果。 6 判定标准 阳性结果：在试纸条上出现两条红色的条带。 阴性结果：在试纸条上仅在质控线处出现一条红色的条带。 无效结果：在质控线不出现红色的条带。 7 废弃物处理 检测过程中的废弃物，应收集后高压灭菌处理。高压灭菌后送到指定的医疗垃圾处理站销毁。 _________________________________ 2