ICS 65.202.30 B 45 DB12 天津市地方标准 DB12/T 952—2020 猪粪中抗生素残留量检测方法 液相色谱-质谱/质谱法 The determination method of antibiotic residues in pig manure by liquid chromatography-mass spectrometry 2020 - 08 - 18发布 2020 - 10 - 01实施 天津市市场监督管理委员会 发布 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由天津市农业农村委员会提出并归口。 本标准起草单位：农业农村部环境保护科研监测所、天津农学院。 本标准主要起草人：支苏丽、张克强、周婧、刘海学、吴惠惠、杜连柱、阮蓉。 猪粪中抗生素残留量检测方法 液相色谱-质谱/质谱法 1 范围 本标准规定了猪粪中抗生素检测的原理、试剂耗材、仪器设备、试样制备、检测步骤、结果计算和 精密度。 本标准适用于生猪养殖场畜舍内以及堆粪场粪便中土霉素、强力霉素、四环素、去甲基金霉素、磺 胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺甲噁唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺多辛、洛美沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、二氟沙 星、氟罗沙星、奥比沙星、氟甲喹、西诺沙星和依诺沙星残留量的检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 NY/T 1896-2010 兽药残留实验室质量控制规范 3 原理 样品中抗生素残留物用甲醇-乙腈-柠檬酸缓冲溶液提取，用固相萃取小柱净化，用液相色谱-质谱/ 质谱测定，外标法定量。 4 试剂材料 4.1 水：GB/T 6682规定的一级水。 4.2 乙腈：色谱级。 4.3 甲醇：色谱级。 4.4 甲酸：色谱级。 4.5 EDTA-McIlvaine缓冲液：称取柠檬酸12.9 g，磷酸氢二钠5.45 g，乙二胺四乙酸二钠37.2 g， 溶于水中，并稀释至1 L。 4.6 0.1%甲酸溶液：取甲酸（4.4）0.5 mL溶于水稀释至500 mL，当天配制。 4.7 标准储备溶液：分别称取适量标准品（精确到0.00001 g），分别用甲醇（4.3）溶解，配制成100 mg/L，置于冰箱-20 ℃保存，保质期6个月。 4.8 标准工作溶液：准确称取抗生素标准储备液（4.7）适量，用甲醇水（v/v=50:50）配制成不同浓 度系列的混合标准工作溶液（用时现配）。 4.9 Oasis HLB固相萃取小柱或者相当：6 mL，500 mg。 4.10 滤膜：0.22 μm，有机系。 5 仪器设备 5.1 液相色谱-串联质谱联用仪：配有电喷雾离子源（ESI源）。 5.2 分析天平：感量0.00001 g和0.01 g。 5.3 旋涡混匀器。 5.4 超声波发生器。 5.5 离心机：最大转速不低于5000 r/min。 5.6 移液器。 5.7 固相萃取装置。 5.8 氮气吹干仪。 5.9 冷冻干燥器。 6 试样制备 取适量样品，将充分的样品进行冷冻干燥并粉碎，粉碎后装入洁净容器，并于-18 ℃避光干燥保存。 7 检测步骤 7.1 提取 称取1.00 g（精确到0.01 g）干燥猪粪样于50 mL离心管中，加入10 mL 乙腈-甲醇- EDTA-McIlvaine 缓冲液（1:1:2，v/v/v）混合液，涡旋1.0 min，100 Hz超声15 min， 4 ℃离心（10000 r/min）15 min， 将上清液吸取到烧杯中，再重复提取一次，将上清液合并，进行适当稀释至有机相低于10%。 7.2 净化 首先用6 mL甲醇和6 mL水，依次活化固相萃取柱，将稀释过的上清液混匀，以大约1 mL/min的速度 通过活化后的HLB固相萃取柱，待过完柱子后，用6 mL水淋洗，真空抽干柱子，用6 mL甲醇洗脱柱子（速 度控制在1 mL/min左右）。将洗脱液于低于40 ℃下氮气吹干，用1.