ICS 65.150 ICS 65.150 DB22 吉 林省地 方标准 DB 22/T 2961—2019 淡水小球藻室内快速培养技术规范 Technical regulations for indoor culture of freshwater Chlorella vulgaris 2019-05-27发布 2019-06-17实施 吉林省市场监督管理厅发布  本标准仅供内部使用 本标准仅供内部使用 印 本标准仅供内部使用 不得翻 印  前言 前言 DB22/T 2961—2019  本标准仅供内部使用 本标准仅供内部使用 印 本标准仅供内部使用 不得翻 印  DB22/T 2961—2019 淡水小球藻室内快速培养技术规范 范围 本标准规定了淡水小球藻（Chlorella vulgaris）培养的术语和定义，环境、设备及水，室内培养， 采收及注意事项。 本标准适用于淡水小球藻室内培养。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 11607 渔业水质标准 NY 5073 无公害食品 水产品中有毒有害物质限量 NY/T 5361 无公害农产品 淡水养殖产地环境条件 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 指数生长期 exponential growth phase 在藻细胞达到一定密度后，藻细胞以指数生长的方式快速增殖的时期。 稳定期 stablephase 在指数生长期之后，藻细胞新生数与死亡数持平，藻细胞数保持稳定状态。 批次培养 batch culture 连续培养 continuous culture 培养至稳定期后进行一次性采收所有藻液，清洗设备后进行重新接种再次培养。 培养至稳定期后，采收部分藻液，采收体积不大于总培养体积的80%，之后通过添加培养基进行继 续增殖培养。 4 环境、设备和水 4.1 环境 应符合 NY/T 5361 的规定。  酸度计、光度计、显微镜和分光光度计。 微孔曝气、光照及二氧化碳供应设备、塑料桶、水族箱、玻璃钢桶、水泥池等。 酸度计、光度计、显微镜和分光光度计。 微孔曝气、光照及二氧化碳供应设备、塑料桶、水族箱、玻璃钢桶、水泥池等。 室内培养 消毒 容器未注水之前用10 mg/L～20 mg/L高锰酸钾浸泡20 min ～30 min，消毒后用大量清水充分清洗， 保证设备内壁无高锰酸钾残留。 DB22/T 2961—2019 4.2 仪器设备 4.2.1 4.2.2 4.3 水 5.2 配置培养基 5.2.1 培养基按照表 1要求配制。 表1 BG11培养基 贮存液 配置体积 （mL） 成分 含量 （g） 1 1000本标准仅供内部使用 NaNO3(+N)/NaCl(-N) 30.00/20.60 K2HPO4·3H2O 0.8000 Na2CO3 0.4000 2 100 柠檬酸 0.3000 柠檬酸铁铵 0.3000 EDTA-Na2 0.05000 3 100 CaCl2·2H2O 1.800 4 100 MgSO4·7H2O 3.750 5 1000 H3BO3 2.860 MnCl2·4H2O 1.810 不得翻印 CuSO4·5H2O 0.0790 Na2MoO4·2H2O 0.3910 Co(NO3)2·6H2O 0.04947 ZnSO4·7H2O 0.2220 6 1000 羟乙基哌嗪乙硫磺酸 119.15 注1：贮存液2容易滋生细菌，高压灭菌后保存于4℃。 注2：贮存液6为保种时用，平时培养可不添加。 5.2.2配制好的培养基用 2 mol/L的 NaOH调 pH到7.4～8.0，置于4℃下保存。 5.3 保种培养 5.3.1容器 2  DB22/T 2961—2019 DB22/T 2961—2019 5.3.2条件 每天检测藻密度。采用血球计数板法计算藻细胞密度，计算出藻液藻细胞密度；或采用分光光度法 在680 nm波长下测量分光光度值，绘制标准曲线后换算出藻液藻细胞密度。 5.3.3.1 生长监测 5.3.3管理 光照强度2000 Lx～3000 Lx，培养温度为（25 ±1）℃，连续充CO2 本标准仅供内部使用 5.3.3.2 更换培养基 稳定期末更换1/2体积培养基。 气体。 5.4 规模培养 5.4.1容器 容器容积控制在1 m 3～2 m 3，深度不大于80 cm。可选用塑料桶、水族箱、玻璃钢桶、水泥池等适 合在室内使用的设备，设备应方便进水和排水。 5.4.2接种 5.4.4温度 光照强度3000 Lx～5000 Lx。 5.4.3光照 按培养体积的20%接种。 本标准仅供内部使 用 生长温度为10℃～35℃，最适生长温度为25℃～30℃。 5.4.5充气 通过微孔曝气设施不断外源补充CO2气体。充气量≥ 2 L/min。 5.4.6 水质控制 5.4.6.1每天监测水质 1次～2次，主要监测温度、pH、氨氮和亚硝酸盐等指标。及时补加预先过滤 小球藻在培养期间的有毒有害物质含量应严格低于 NY 5073的规定。 消毒的新水。 5.4.6.2 5.4.7 生长监测 见5.3.3.1。 6 采收 6.1 条件  方法 方法 连续培养采用少量多次的方式，每次收获量不能超过培养体积的80%。 注意事项 严格控制轮虫等浮游动物。若在培养初期轮虫等浮游动物出现，应当舍弃，重新培养。 DB22/T 2961—2019 当藻细胞密度到达稳定期后进行采收。 。。。。。。以下内容略