鼠李糖脂的菌体吸附及其对菌体表面的改性作用研究 汇报人 指导老师 背景和目的 疏水性有机物污染的土壤的原位修复中，外源微生物在土壤介质中的高效传输及在有机污染物上的富集可以提高修复效率 在土壤修复过程中，生物表面活性剂增溶污染物的同时，有可能与微生物菌体发生作用，改变菌体的表面性质，实现上述功能 本论文作为上述目的的应用基础研究，考察了生物表面活性剂鼠李糖脂在微生物菌体上的吸附规律以及由吸附所引起的菌体表面亲水疏水性的变化规律 鼠李糖脂的产生、提纯和表征 方法 产生：产生菌为Pseudomonas aeruginosa CCTCC AB93066，以20g/L的葡萄糖为碳源，在MSM溶液中，于30℃、200rpm条件下，发酵培养72h，获得最大产剂量。 分离和提纯：首先通过离心将菌体从发酵液中分离，再采用酸沉降法将鼠李糖脂粗产品从发酵液中分离出来，将粗产品冷冻干燥并溶于氯仿后，过滤除去不溶性杂质，滤液通过硅胶柱层析除去其它杂质，并将单糖脂和二糖脂分离。二糖脂经过两次柱层析实现完全纯化。 表征：采用高效液相色谱-质谱联用对提纯的鼠李糖脂单糖脂和二糖脂及其2-溴代苯乙酮的衍生物进行化学成分表征 结果与讨论 鼠李糖脂单糖脂混合物外观上呈棕色粘稠油状；鼠李糖脂二糖脂混合物呈黄色膏状或白色微黄的晶体状。各部分鼠李糖脂的HPLC-MS图谱如下 m/z 鼠李糖脂单糖脂HPLC-MS图谱。a) HPLC图谱；b) 12.5-13 min m/z 1006.9 [(RhaC10C10)2-H]-；c) 14-14.5 min m/z 529.1 [RhaC10C12-H2-H]-；d) 15-15.5 min m/z 531.1 [RhaC10C12-H]- a b c d m/z 鼠李糖脂单糖脂的2-溴代苯乙酮衍生物的HPLC-MS图谱。a) HPLC色谱图；b) 14.5-15.0 min m/z 640.1 [RhaC10C10苯甲酰甲脂+NH4+]；c) 15.5-16.0 min m/z 665.9 [RhaC10C12-H2苯甲酰甲脂+NH4+]；d) 16.5-17.0 min m/z 668.0 [RhaC10C12苯甲酰甲脂+NH4+] a c b d m/z 一次柱层析得到的鼠李糖脂二糖脂的HPLC-MS图谱。a) HPLC图谱；b) 10.5-11 min m/z 649.1 [Rha2C10C10-H]-；c) 12-12.5 min m/z 675.0 [Rha2C10C12-H2-H]-；d) 12.5-13 min m/z 503.0 [RhaC10C10-H]-；e) 13-13.5 min m/z 677.1 [Rha2C10C12-H]- a b c d e m/z 一次柱层析得到的鼠李糖脂二糖脂的2-溴代苯乙酮衍生物的HPLC-MS图谱。 a) HPLC色谱图；b) 13-13.5 min m/z 786.1 [Rha2C10C10苯甲酰甲脂+NH4+]；c) 14-14.5 min m/z 812.2 [Rha2C10C12-H2苯甲酰甲脂+NH4+]；d) 14.5-15 min m/z 723.9 [RhaC10C10苯甲酰甲脂+(CH3CH2)3NH+]或640.0 [RhaC10C10苯甲酰甲脂+NH4+]；e) 15-15.5 min m/z 814.2 [Rha2C10C12苯甲酰甲脂+NH4+] a b d c e m/z 二次柱层析提纯的鼠李糖脂二糖脂的HPLC-MS图谱。a) HPLC图谱；b) 7.0-8.0 min m/z 621.1 [Rha2C10C8-H]-；c) 9.5-10.0 min m/z 647.1 [RhaC10C10-H2-H]-；d) 10.5-11.0 min m/z 649.0 [Rha2C10C10-H]-；e) 12.0-12.5 min m/z 675.0 [Rha2C10C12-H2-H]-；f) 13.0-13.5 min m/z 677.0 [Rha2C10C12-H]- a b c d e f